一、外植体的选取
(1)选择品种纯、花色好、无病虫害的健康植株,剪取株体内部新叶(淡黄绿色),将叶柄两侧叶片用消毒剪刀剪去,并将其叶柄剪成0.5厘米一段,放入消过毒的三角瓶中待用。将三角瓶中备好的外置体,用70%酒精和次氯酸钠进行灭菌消毒,并用无菌水冲洗干净。
(2)选取健壮植株,取未展开的、直径约1厘米大小的花蕾,带花梗切下,用纱布蘸洗涤利擦洗表面后,在流水下冲洗1-2小时。在超净台上用75%酒精浸泡40秒,取出后放入0.1%升汞溶液中消毒8-10分钟,再用无菌水冲洗5-7次,晾干。剥去苞片和舌状花瓣,留下花托,切成两瓣,接种于培养基中。
(3)培养条件。培养基有四类,包括诱导芽培养基:ms+iba(0.5-1毫克/升);继代培养基:同诱导芽培养基;生根培养基ms+ba(0.5-1毫克/升)+iaa(0.5-1毫克/升),琼脂0.8%-1%,蔗糖3%,ph值5.8-6.0;芽分化培养基:ms+ba(10毫克/升)+iaa(0.5毫克/升);继代培养增殖培养基:ms+kt(10毫克/升);生根培养基:1/2ms+naa(0.03毫克/升)。培养环境的温度为20-22℃,光照强度1500-2000勒克斯,每天光照10-12小时。